診斷菌液由滅活細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)化懸液組成，供人血清相應(yīng)凝集素的半定量凝集反應(yīng)試驗(yàn)用（玻片法或試管法）。這些血清中的凝集素為感染導(dǎo)致發(fā)熱的細(xì)菌（布魯氏菌、沙門氏菌和某些立克次氏體1,2 ）時(shí)產(chǎn)生的抗體。通過檢測(cè)細(xì)菌抗原-細(xì)胞壁抗原，藍(lán)色；鞭毛抗原，紅色-與待測(cè)樣品的反應(yīng)來分析結(jié)果，出現(xiàn)可見凝集的樣本即為對(duì)應(yīng)抗體陽性。

試劑組成

抗原細(xì)菌抗原。穩(wěn)定的滅活細(xì)菌緩沖溶液懸液。陽性質(zhì)控布魯氏菌、沙門氏菌、變形桿菌。含有相應(yīng)抗體的動(dòng)物血清。

陰性質(zhì)控凝集素- 陰性。無反應(yīng)性的動(dòng)物血清。

注意：試劑中含有 0.95g/L 的*，避免接觸皮膚或粘膜。

試劑的準(zhǔn)備

抗原與質(zhì)控品為即用型。

樣本

樣本為新鮮清澈的血清。

血清分離后可在 2-8℃下可以保存 1 周，在-20℃下可保存更長

時(shí)間。

需要但未提供的材料

- 玻璃或白色檢驗(yàn)卡。

- 一次性攪拌棒。

- 試管（12×100mm）

- 自動(dòng)移液管。

- 機(jī)械搖床，可調(diào)節(jié)。

- 恒溫槽（30℃-50℃）。

實(shí)驗(yàn)步驟

一、定性試驗(yàn)

1. 將試劑和樣本置于室溫下。

2. 輕輕重懸試劑瓶中的抗原。用滴管吹吸數(shù)次*混勻。

3. 在檢測(cè)卡圈內(nèi)滴50μL 待測(cè)血清，檢測(cè)布魯氏菌抗體時(shí)20μL

即可（注釋 1 和注釋 2）。另外滴 1 滴陽性對(duì)照血清和 1 滴

陰性對(duì)照血清。

4. 在待測(cè)血清樣本旁再滴 1 滴充分混勻的細(xì)菌懸液。

5. 用一次性攪拌棒混合懸液和待測(cè)樣本，每組混合液均使用單

獨(dú)的攪拌棒。

6. 手動(dòng)或用機(jī)械搖床（100r.p.m.）輕輕晃動(dòng) 1 分鐘。

7. 立即于適當(dāng)?shù)墓庠聪掠^察凝集度。

結(jié)果讀?。?/span>

陰性結(jié)果：和陰性對(duì)照一樣的平滑懸液，沒有可見凝集。

陽性結(jié)果：肉眼可見的任何程度的凝集。

二、半定量試驗(yàn)

1. 檢驗(yàn)卡的圓圈內(nèi)分別滴 80μL、40μL、20μL、10μL 和 5μL

同一待測(cè)樣本。

2. 按定性試驗(yàn)方法中的步驟4-步驟7檢測(cè)每個(gè)稀釋度的樣本。

結(jié)果讀取：

同定性試驗(yàn)。樣本凝集效價(jià)按出現(xiàn)凝集的zui高稀釋度計(jì)算。

三、試管凝集試驗(yàn)

1. 用鹽水作為稀釋劑，按下表方法為每種抗原檢測(cè)準(zhǔn)備一系

列倍比稀釋樣本。

2. 按順序向每個(gè)試管加 1 滴重懸好的懸液。血清的zui終稀釋

度應(yīng)為 1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640。

3. 37℃下孵育 24 小時(shí)。（注釋 4）。

4. 肉眼檢查凝集。

結(jié)果讀?。?/span>

首先讀取對(duì)照結(jié)果。檢查管底凝集狀態(tài)，然后輕輕搖動(dòng)試管判定結(jié)果。陰性結(jié)果：陰性反應(yīng)和懸浮對(duì)照管沒有可見凝集。輕彈懸浮對(duì)照管，產(chǎn)生典型漩渦。陽性結(jié)果：不同程度的部分或*凝集，與上清液分離。以能見到凝集的zui高稀釋度為凝集效價(jià)。比此稀釋度高的下一濃度稀釋液應(yīng)為陰性。

質(zhì)量控制

陽性和陰性血清及懸浮質(zhì)控管應(yīng)每日試驗(yàn)以驗(yàn)證系統(tǒng)的有效性。

參考值

沙門氏菌和布魯氏菌：細(xì)胞壁抗原和布魯氏菌抗原凝集效價(jià)高于 1/80，鞭毛抗原凝集效價(jià)高于 1/160 表明近期感染。變形桿菌：小于 1/160 的凝集效價(jià)應(yīng)認(rèn)定為有意義。

單獨(dú)的陽性結(jié)果臨床意義小，幾天分別采取的連續(xù)血清樣本凝集效價(jià)出現(xiàn)上升或減小更具有臨床意義。

臨床意義

發(fā)熱性抗原是一個(gè)術(shù)語,它已被*為指代能夠代表許多感染人的病原微生物的細(xì)菌懸浮液,包括一些細(xì)菌感染病(布魯氏菌病、沙門氏菌病和某些立克次體病),都伴隨著宿主發(fā)熱。確認(rèn)

傳染病病原的方法是分離鑒定病原體。但是培養(yǎng)技術(shù)可能難以應(yīng)用，所以發(fā)熱病例血清學(xué)試驗(yàn)對(duì)感染期間患者血清中產(chǎn)生抗體的檢測(cè)變得十分重要（間接診斷方法）。

檢測(cè)發(fā)熱性抗原具有很高的診斷價(jià)值，它的排除或檢測(cè)能夠在試探性診斷中支持或移除基于病例和臨床癥狀的疑似病例。

分析性能

- 沒有該試劑的敏感性標(biāo)準(zhǔn)參考材料。因此，健侖公司依據(jù)有質(zhì)量保證的特異性抗血清和實(shí)際產(chǎn)品調(diào)整該產(chǎn)品的敏感性。

- 前帶效應(yīng)：血清含有高滴度抗體時(shí)可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。這樣樣本的稀釋液將得出陽性結(jié)果。

- 該試劑得到的結(jié)果與參考試劑相比沒有顯著差異。根據(jù)要求我們將提供比對(duì)試驗(yàn)詳情。

- 血紅蛋白（＜10g/L），膽紅素（小于 20mg/dL），脂血（＜10g/L）和類風(fēng)濕因子（＜100IU/mL）不會(huì)產(chǎn)生干擾。

方法局限性

- 在疾病早期和免疫缺陷病例中可能出現(xiàn)生物學(xué)性的假陰性反應(yīng)。

- 經(jīng)抗生素治療的傷寒患者可能出現(xiàn)假陰性細(xì)胞壁（O 抗原）

測(cè)試結(jié)果。

- 在感染一些弧菌（彎曲桿菌）、巴氏桿菌、變形桿菌 OX19和小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（血清型 9）的一些菌株的病例中布魯氏菌抗原可能出現(xiàn)假陽（交叉反應(yīng)），接種過霍亂弧菌

的病人也會(huì)出現(xiàn)類似的假陽性。

注釋

1. 決不能使用本試劑檢測(cè)慢性布魯氏菌病。應(yīng)使用孟加拉紅培養(yǎng)基和試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)樣品。

2. 在一些發(fā)熱性疾病高發(fā)地區(qū)，推薦在試驗(yàn)前用鹽水（0.95%）按 1:4 稀釋樣本。

3. zui終稀釋度大約分別為 1:20,1:40,1:80,1:160 和 1:320。

4. 可選孵育條件：細(xì)胞壁抗原（O）和變形桿菌抗原于 48-50℃

孵育 4 小時(shí)。

鞭毛抗原（H）于 48-50℃孵育 2 小時(shí)。

誤差來源

- 使用超過保質(zhì)期的抗原可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

- 細(xì)菌污染抗原、樣品或鹽溶液，或懸液遭冷凍可能導(dǎo)致假陽

性結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

1. Felix, A. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 37: 321 (1944).

2. Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. Wld. Hlth. Org.

Tech. Rep. Ser. 148: 1 (1958).

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